Valoración de desempeño test rápido

VALORACIÓN DEL DESEMPEÑO DE MÉTODOS DE DETECCIÓN DE ANTICUERPOS DEL TIPO IgG/IgM ANTI SARS-CoV-2. VIRUS CAUSANTE DE LA ENFERMEDAD COVID-19

INTRODUCCIÓN

La pandemia de COVID-19 representa una crisis de salud global masiva en la cual el mundo de la ciencia tuvo y tiene que dar respuestas aceleradas. En tiempo record se identificó el virus causante de la enfermedad, se secuencio su material genético y se desarrollaron kits diagnósticos por rt-PCR. Con no menos celeridad, se desarrollaron y se empezaron a comercializar los test para determinar anticuerpos anti SARS-CoV-2, y, todo el mundo empezó a hablar de los ¨Test Rápidos¨ con sus usos, sus utilidades y sus falencias.

A poco menos de medio año sabemos que el SARS-CoV-2 es un virus de ARN monocatenario, perteneciente a la familia Coronaviridae. Los coronavirus están compuestos por 16 proteínas no estructurales y 4 proteínas estructurales: espiga, envoltura, membrana y nucleocápside.  Los coronavirus causan enfermedades con síntomas que van desde un resfrío común leve hasta los más graves, como la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19) causada por el SARS-CoV-2.

El SARS-CoV-2 se transmite de persona a persona principalmente a través de microgotas respiratorias, mientras que también podría ser posible la transmisión indirecta a través de superficies contaminadas. El virus accede a las células huésped a través de la enzima
convertidora de angiotensina 2 (ACE2), presente principalmente en pulmones. 
El período de incubación de COVID-19 varía de 2 a 14 días después de la exposición, y la mayoría de los casos muestran síntomas aproximadamente de 4 a 5 días después de la exposición. El espectro de infección sintomática varía de leve (fiebre, tos, odinofagia, fatiga, pérdida del olfato, pérdida del gusto, dificultad para respirar) a crítico. Si bien la mayoría de los casos sintomáticos no son graves, los adultos con edad avanzada o comorbilidades médicas crónicas requieren cuidados intensivos por desarrollar cuadros graves de COVID-19.
El síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA) es una complicación importante en pacientes con enfermedad grave. Los casos críticos se caracterizan, por ejemplo, por insuficiencia respiratoria, shock y / o disfunción o falla multiorgánica.

El diagnóstico definitivo de COVID-19 implica la detección directa de SARS-CoV-2 mediante la amplificación de ácidos nucleicos por rt-PCR.

La infección por COVID-19 también se puede detectar indirectamente midiendo la respuesta inmunitaria del huésped a la infección por SARS-CoV-2.

El diagnóstico serológico es especialmente importante para los pacientes con enfermedad leve a moderada que pueden presentar síntomas tardíos, más allá de las primeras 2 semanas de inicio de la enfermedad.

El diagnóstico serológico también se está convirtiendo en una herramienta importante para entender el alcance de COVID-19 en la comunidad e identificar a las personas que son inmunes y potencialmente “protegidas” de infectarse.

Además, identificando los individuos expuestos al virus, los ensayos serológicos pueden contribuir a evaluar el grado de exposición de una población. Podrían, por lo tanto, ayudar a decidir sobre la aplicación, ampliación o atenuación de las medidas de contención.

OBJETIVOS

• Enfrentar tres (3) marcas de reactivos para Inmunoglobulinas IgG e IgM anti Sars-CoV-2 a
sueros de pacientes COVID-19 positivos y negativos.

• Comparar con un cuarto equipo por la técnica de Electroquimioluminiscencia y comparar las distintas performances para elegir cuál recomendar para el uso de estudios epidemiológicos o de investigación en los laboratorios de la Provincia de Rio Negro.

MUESTRAS Y MÉTODOS

 Las muestras fueron seleccionadas por distintos nosocomios de la Provincia de Río Negro. Se eligieron pacientes diagnosticados COVID-19 POSITIVOS POR RT- PCR. Las muestras fueron tomadas en diferentes días, posterior al hisopado positivo para SARS-CoV-2. Se analizaron muestras de pacientes con síntomas leves, intermedios y graves. También se analizó una muestra de paciente con síntomas, pero resultado del hisopado negativo.

En la siguiente tabla se detallan las historias clínicas de cada muestra.

tabla se detallan las historias clínicas de cada muestra

Se probaron los siguientes kits comerciales:

  • Quick profile 2019-nCoV IgG/IgM Test Card, LumiQuick Diagnostics, Fabricado en Países Bajos. Inmunocromatografía. (Lote 20042789). Con IgG e IgM montadas en el mismo soporte.
  • COVID-19 IgM/IgG DUO, STANDARD Q. SD BIOSENSOR. Fabricado en Corea. Inmunocromatografía. (Lote COD120024). Con IgG e IgM montadas en soportes individuales.
  • Elecsys Anti-SARS-CoV-2, Electroquimioluminiscencia COBAS, ROCHE, Fabricado en Alemania. Electroquimioluminiscencia. (Lote 49629801) En la siguiente tabla se detalla la sensibilidad y especificidad declarada por cada fabricante.

En la siguiente tabla se detalla la sensibilidad y especificidad declarada por cada fabricante

RESULTADOS

CONCLUSIONES

  • #1 Performance poco satisfactoria del reactivo QUICK PROFILE IgG/IgM por los siguientes motivos:
  • No presenta sensibilidad para IgM. No resultó positiva en ninguna de las muestras que para la teoría y para el reactivo Standard Q estaba presente.
  • La positividad de la única IgM que presentó marca, fue muy tenue, lo que dificulta su lectura y hasta puede quedar sujeta a la interpretación de cada operador.
  • En la muestra Negativa por rt-PCR y por los otros dos métodos, este reactivo dio un Falso Positivo.
  • #2 Performance satisfactoria del reactivo STANDARD Q COVID – 19 IgM/IgG DUO TEST, basándonos en los siguientes argumentos:
  • Presenta reactividad para IgG, revelando bandas de intensidad más que aceptables para su lectura e interpretación, evitando subjetividades del operador.
  • La intensidad de las bandas mantendría una relación con la cantidad de anticuerpos presentes. Si bien habría que testear más muestras para tener una conclusión más certera, las muestras testeadas guardan relación entre intensidad de banda y
    semicuantificación por Electroquimioluminiscencia.
  • Presenta reactividad para IgM, detectándola en todos los pacientes en los que teóricamente debería estar presente la inmunoglobulina, se detecta desde el día 7 post rt-PCR positiva.
  • La intensidad de la banda para IgM es aceptable para su correcta lectura e interpretación.
  • Si bien es necesario el testeo de mayor cantidad de muestras, interpretando la intensidad de la banda y en relación a los días de evolución de cada paciente, la detección de IgM por este método guarda relación con la curva teórica descripta para la inmunoglobulina M en Covid-19.
  • #3 Performance poco satisfactoria del reactivo PanbioTM IgG/IgM por los siguientes motivos:
  •  No presenta sensibilidad para IgM. No resultó positiva en ninguna de las muestras que para la teoría y para el reactivo Standard Q estaba presente.
  • #4 Performance satisfactoria del reactivo ELECSYS Anti-SARS-CoV-2 para la semicuantificación de inmunoglobulinas del tipo IgG, nos basamos en la siguiente evidencia analítica:
  • Semicuantifica inmunoglobulinas en pacientes que teóricamente y analíticamente (Inmunocromatografía positivas) estaban presentes Correlaciona el valor de semicuantificación con los días de evolución de la enfermedad
  • No detecta IgM. Si bien esto se manifestó en una sola muestra (4) que dio positiva para IgM y negativa para IgG por Inmunocromatografía, para la electroquimioluminiscencia fue negativa. Bajo esta única evidencia y remarcando que el inserto no es claro y no especifica concretamente qué detecta, hasta tanto no haya más publicaciones no recomendamos su uso para pacientes de pocos días de evolución. Pacientes donde la seroconversión de IgM a IgG no haya ocurrido podrían resultar en un falso negativo.

DISCUSIÓN

A causa de la Pandemia COVID-19, los Laboratorios de todo el mundo debieron dar respuesta rápida, produciendo test serológicos que permitan evaluar el contacto y la inmunidad de las personas contra el SARS-CoV-2. Esta celeridad hizo que se produzcan gran cantidad de test defectuosos, y que el fracaso de los mismos ponga en tela de juicio su uso, utilidad y confianza.

Por esta razón es imperiosamente necesario que cada kit serológico anti SARS-CoV-2 que se adquiera sea validado por  profesionales Bioquímicos, enfrentado los mismos a sueros positivos y negativos para COVID-19 y analizados los resultados.

En este trabajo se testearon cuatro kits comerciales diferentes contra 9 sueros de pacientes que fueron hisopados para SARS-CoV-2. Los resultados demuestran que el reactivo seleccionado para el uso en los laboratorios de la Provincia de Rio Negro es competente para la detección de Anticuerpos IgG e IgM en pacientes COVID-19 positivos y curados.

Por la cantidad de muestras testeadas no es posible realizar análisis de cálculos matemáticos de Sensibilidad, Especificidad, VPP y VPN, pero si es evidente que el reactivo STANDARD Q COVID – 19 IgM/IgG DUO TEST cumple con las especificaciones de inserto.

REFERENCIAS

Comisión de Calidad, Armonización y Prevención

Colegio de Bioquimicos de la Provincia de Río Negro

Aportando en Salud para una mejor calidad de vida